Dénombrement en anaérobiose des bactéries sulfito-réductrices par comptage des colonies (ASR)

1-Référence :

Méthode de routine XP V 08-061

2-Principe :

Ensemencement en profondeur d’un milieu gélosé tryptose sulfite à la cyclosérine exempt de jaune d’œuf, coulé dans une boîte de Pétri, avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d’autres produits. Recouvrement avec une couche du même milieu.

Dans les même conditions, ensemencement d’autres boîtes avec les dilutions décimales obtenues à partir de l’échantillon pour essai ou de la suspension mère.

Incubation des boîtes à 46°C en anaérobiose pendant 20 h ±2h.

Dénombrement des colonies caractéristiques (entourées d’un halo noir).

3-Appareillage :

- Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four) ou en chaleur humide (Autoclave)

- Etuve, réglable à 46°C ± 1°C

- Jarres pour anaérobiose ,

- Boîte de Pétri stériles de diamètre 90 mm ou 140mm

- Bain thermostaté réglable à 47°C ± 2°C

- Tubes à essai et flacons de capacité appropriée

- Propipette de capacité nominales de 1ml

- Pipette paille de 1 ml

- pH- mètre, précis de 0,001 unité pH

-Stomacher

-Compteur colonie

-Postes de sécurité microbiologiques

4-Réactifs :

- Eau Peptonée Tamponnée (EPT)

- Gélose Tryptose-sulfite à la cyclosérine (TSC)

- Supplément D-cyclosérine

- Indicateur d’anaérobiose

- Générateur de CO₂

5- Méthode :

Voir la page correspondante

6- Expression des résultats :

* Cas général :

Où :

Σ C : est la somme des colonies comptées sur les boîtes retenues de deux dilutions successives.

V : est le volume de l’inoculum applique à chaque boîte, en millilitres

n1 : est nombre des boîtes retenues à la première dilution

n2 : est nombre des boîtes retenues à la seconde dilution

d : est le taux de dilution correspondant à la première dilution retenue.