Dénombrement des microorganismes par comptage des colonies obtenues à 30°C (FMAT)

1-Référence :

Méthode de routine NF V 08-051

2-Principe :

Ensemencement en profondeur d’un milieu de culture défini Plat Count Agar (PCA), coulé dans une boîte de Pétri, avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d’autres produits.

Dans les même conditions, ensemencement d’autres boîtes avec les dilutions décimales obtenues à partir de l’échantillon pour essai ou de la suspension mère.

Incubation des boîtes à 30°C en aérobiose pendant 72 h ± 3 h.

A partir du nombre de colonies obtenues dans les boîtes de Pétri retenues, calcul du nombre de microorganismes par millilitre ou par gramme d’échantillon.

3- Appareillage :

- Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four)

- Appareil pour la stérilisation en chaleur humide (Autoclave)

- Etuve, réglable à 30°C ± 1°C

- Boîtes de Pétri stériles de diamètre 90 mm

- Bain thermostaté réglable à 47°C ± 2°C

- Tubes à essai et flacons de capacité appropriée

- Propipette de capacité nominales de 1ml

- Pipettes Paille de 1 ml

- pH- mètre, précis de 0,001 unité pH

-Stomacher

-Compteur colonie

-Postes de sécurité microbiologiques

-Brûleurs à gaz

4- Diluants et milieux de culture :

- Eau Peptonée Tamponnée (EPT)

- Plat Count Agar (PCA)

5- Méthode :

Voir les pages suivantes.

6- Expression des résultats :

* Cas général :

Où :

Σ C : est la somme des colonies comptées sur les boîtes retenues de deux dilutions successives.

V : est le volume de l’inoculum appliqué à chaque boîte, en millilitres

n1 : est nombre des boîtes retenues à la première dilution

n2 : est nombre des boîtes retenues à la seconde dilution

d : est le taux de dilution correspondant à la première dilution retenue.