les dangers chimiqueet biologique dans le laboratoire

Dangers chimiques

Les équipements de protection collectifs doivent être utilisés avant les équipements de protection individuelle. En effet, le port du masque en laboratoire protège la personne qui manipule mais ne protège pas les autres personnes présentes dans le laboratoire. Le travail confiné sous une hotte aspirante enlève la pénibilité du port du masque et protège les autres.

La personne manipulant des flacons contenant des produits du commerce est exposée à tout moment aux risques chimiques. Avant toute manipulation d'un flacon, il convient de :

• porter l'équipement de protection adapté : blouse en coton, lunettes de protection agréées CEE, gants de protection ;
• manipuler des flacons sous une hotte ventilée (pour les acides ou bases concentrés par exemple) ;
• vérifier la verrerie de laboratoire avant toute manipulation pour éviter coupures (matériel ébréché) ou casse du matériel en cours d'utilisation (verrerie ébréchée, éclats, ...) ;
• toujours mettre un bac de rétention sous par exemple les réacteurs et les bouteilles non vides afin de ne pas répandre de liquide en cas d'incident avec le matériel ;
• ne pas prélever à la bouteille. Transvaser dans un grand bécher propre et annoter le volume nécessaire pour les manipulations. Cela évite de se retrouver avec des solutions « polluées » ;
• se référer aux pictogrammes des tableaux ci-dessous ; ceux du second tableau étant en cours d'abandon, ils ne devront plus être utilisés d'ici la fin 2011 pour les substances, fin 2012 (2013) pour les mélanges et les préparations.

Code	Pictogramme	Interprétation	Remarques
SGH01		Explosif	Rend SGH02 et SGH03 facultatifs
SGH02		Inflammable
SGH03		Comburant
SGH04		Gaz sous pression
SGH05		Corrosif	Rend SGH07 facultatif
SGH06		Toxique	Rend SGH07 facultatif
SGH07		Toxique, irritant, sensibilisant, narcotique
SGH08		Sensibilisant, cancérogène, mutagène, reprotoxique	Rend SGH07 facultatif
SGH09		Danger pour l'environnement

Pictogramme	Signification	Commentaires
	Produit InFlammable, F	Ce symbole désigne les produits inflammables, ils sont donc à utiliser loin d'une flamme ou d'une source de chaleur (F = facilement inflammable, F+ = extrêmement inflammable).
	Produit Corrosif, C	Ce symbole désigne les produits corrosifs, ils s'attaquent aux tissus biologiques ainsi qu'aux matériaux.
	Produit Explosif, E	Ce symbole désigne les produits qui ont la capacité d'exploser lors d'un choc ou s'ils sont exposés à une source de chaleur.
	Produit Nuisible pour l'environnement, N	Ce symbole désigne les produits néfastes pour l'environnement, ils sont donc à récupérer après utilisation pour qu'ils soient traités (cas des solvants organiques).
	Produit cOmburant, O	Ce symbole désigne les produits comburants, ils facilitent la combustion, ils sont donc à utiliser loin d'une flamme ou d'une source de chaleur.
	Produit Toxique, T	Ce symbole désigne les produits toxiques, ils peuvent donner la mort à faibles doses et doivent être manipulés avec les protections adéquates.
	Produits irritant ou nocif, Xi et Xn	Ce symbole désigne les produits irritants ou nocifs, ils peuvent occasionner des désagréments pour la santé. Ils doivent être manipulés avec les protections adéquates.

Dangers biologiques

Pictogramme signalant l'ensemble des risques biologiques

• Ce pictogramme est présent à l'entrée d'un laboratoire de microbiologie ou de biologie, ainsi que sur les conteneurs destinés à recevoir les déchets (boîte de Petri en plastique, pipette Pasteur, tube à hémolyses, etc.) ou des produits biologiques (prélèvement ESB, sang, ...).
• Il signifie la contamination probable par un agent biologique de nature connue ou non (bactéries, protozoaires, virus, prions, etc.).
• À la vue de ce symbole, respecter les règles d'asepsie, se laver les mains à l'eau et au savon après les manipulations.
• En cas d'accident (déversement sur la paillasse, coupure avec un matériel contaminé, ...) laver et désinfecter la plaie et/ou le plan de travail.
• Protéger les plaies par un pansement et des gants en latex ou en vinyle.
• Tenir le carnet de vaccination à jour.

Risque radiologique

Panneau identifiant les risques liés aux rayonnements ionisants, ☢

Pictogramme présent dans tous les centres de radiologie ainsi que chez les médecins possédant un équipement de radiologie. Il doit être visible à l'entrée de chaque pièce possédant un équipement dont le rayonnement présente un danger, que ce soit pour une exposition à court ou à long terme.

Retrait des gants

Comme indiqué précédemment, les gants sont très utiles pour se protéger les mains, cependant la protection est nulle si on ne sait pas comment les retirer :

• plier le poignet d'une main vers le bas ;
• avec l'autre main, pincer l'extrémité du gant ;
• retirer le gant jusqu'aux phalanges, on doit voir la face interne se retourner sur la face externe ;
• plier le second poignet et retirer le gant complètement avec les doigts encore protégés de la seconde main ;
• se débarrasser du dernier gant en le faisant tomber en bougeant les doigts.

Securité en laboratoire

Sécurité en laboratoire

Moyens de sécurité (à maintenir dégagés et à vérifier périodiquement), avec leur pictogramme, en laboratoire de chimie

La sécurité en laboratoire renvoie à de multiples aspects (prévention technique, respect d'un minimum de consignes, formation du personnel, organisation du travail, qualité des relations).

Lors de son travail, le personnel de laboratoire s'expose à des dangers chimiques, physiques, biologiques et radiologiques.

Ces dangers peuvent être évités ou limités, si les règles élémentaires de sécurité sont respectées. Dans un laboratoire, il faut avoir une attitude réfléchie pour ne pas mettre sa vie en danger ni celle d'autrui.

Règles générales de sécurité dans un laboratoire

Obligations

• Se laver soigneusement les mains en entrant/sortant du laboratoire, avant de prendre un repas, ou avant d'aller aux toilettes.
• Repérer les emplacements des matériels de sécurité : douche fixe de premiers secours, douche portative de secourisme, extincteur, rince-œil, couverture antifeu, robinet d'incendie armé, etc.
• Retirer tous ses bijoux, ne pas porter de maquillage, attacher les cheveux.
• Porter une blouse en coton et non en polyester (le coton brûle en cas de contact avec une flamme, alors que le polyester fond et adhère à la peau).
• Se protéger pendant les manipulations (porter lunettes de sécurité, masque, gants, tablier, etc.) (protection contre les produits chimiques, la chaleur, les coupures, les chocs, les radiations, etc.). Voir Équipement de protection individuelle (EPI).
• Ne rien laisser traîner au sol ou sur les paillasses.
• Ne pas stocker des contenants dangereux (flacons en verre, ...) près d'un bord de paillasse, ou sur un bord d'étagère.
• Éviter les accumulations de grandes quantités (solvants, emballages, déchets, etc.) au laboratoire.
• Arrimer solidement les bouteilles de gaz et les éloigner de toute source de chaleur ou de projections de produits corrosifs. Les stocker à l'extérieur (demander une alimentation extérieure).
• Ranger le matériel dès qu'il n'est plus nécessaire afin de ne pas être gêné lors des prochaines manipulations, apprendre également à gérer l'espace de travail et le temps dont on dispose.
• Tous les flacons et emballages doivent sans exception avoir une étiquette sur laquelle on retrouve le nom, la formule, le(s) pictogramme(s) et le(s) code(s) de sécurité définis par le Système général harmonisé (SGH), et la date de péremption.
• Lire les instructions d'un matériel ou d'un flacon du commerce.
• Vérifier le matériel en verre avant utilisation (éliminer tout verre fêlé, étoilé, ...).
• Se référer aux pictogrammes quand ils sont présents et aux codes du SGH.
• Mettre les poisons, les matières dangereuses, les acides, les bases, les liquides inflammables, les produits périmés, dans des endroits protégés tels les armoires de sécurité dédiées et clairement identifiées.
• Installer une poubelle pour la verrerie et une pour les métaux.
• Vérifier régulièrement les moyens de sécurité (extincteurs, alarmes d'incendie visuelles et sonores, détecteurs de fumée, indicateurs lumineux permanents de direction d'évacuation, ventilation, etc.) ainsi que le dégivrage des réfrigérateurs/congélateurs.

Penser « sécurité » c'est réfléchir avant d'agir.

Interdictions[modifier]

• De fumer, boire, préparer un repas ou manger dans un laboratoire.
• De travailler seul.
• De pipetter à la bouche tout produit chimique ; utiliser par exemple les propipettes.
• Formelle de déverser à l’évier des produits chimiques (dangereux : inflammables, explosifs, ...), biologiques ou radioactifs.
• De manipuler un produit inflammable à proximité d’une flamme ou d’un point chaud.
• De courir.
• De manipuler sans lunettes de protection, sans blouse et sans gants adaptés (selon les produits : latex, nitrile, vinyle, etc.).

verrerie

Dénombrement en anaérobiose des bactéries sulfito-réductrices par comptage des colonies (ASR)

1-Référence :

Méthode de routine XP V 08-061

2-Principe :

Ensemencement en profondeur d’un milieu gélosé tryptose sulfite à la cyclosérine exempt de jaune d’œuf, coulé dans une boîte de Pétri, avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d’autres produits. Recouvrement avec une couche du même milieu.

Dans les même conditions, ensemencement d’autres boîtes avec les dilutions décimales obtenues à partir de l’échantillon pour essai ou de la suspension mère.

Incubation des boîtes à 46°C en anaérobiose pendant 20 h ±2h.

Dénombrement des colonies caractéristiques (entourées d’un halo noir).

3-Appareillage :

- Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four) ou en chaleur humide (Autoclave)

- Etuve, réglable à 46°C ± 1°C

- Jarres pour anaérobiose ,

- Boîte de Pétri stériles de diamètre 90 mm ou 140mm

- Bain thermostaté réglable à 47°C ± 2°C

- Tubes à essai et flacons de capacité appropriée

- Propipette de capacité nominales de 1ml

- Pipette paille de 1 ml

- pH- mètre, précis de 0,001 unité pH

-Stomacher

-Compteur colonie

-Postes de sécurité microbiologiques

4-Réactifs :

- Eau Peptonée Tamponnée (EPT)

- Gélose Tryptose-sulfite à la cyclosérine (TSC)

- Supplément D-cyclosérine

- Indicateur d’anaérobiose

- Générateur de CO₂

5- Méthode :

Voir la page correspondante

6- Expression des résultats :

* Cas général :

Où :

Σ C : est la somme des colonies comptées sur les boîtes retenues de deux dilutions successives.

V : est le volume de l’inoculum applique à chaque boîte, en millilitres

n1 : est nombre des boîtes retenues à la première dilution

n2 : est nombre des boîtes retenues à la seconde dilution

d : est le taux de dilution correspondant à la première dilution retenue.

Dénombrement des coliformes thermotolérants par comptage des colonies obtenues à 44°C

1- Référence :

Méthode de routine NF V 08-060

2- Principe

Ensemencement en profondeur du milieu gélosé à la bile, au rouge neutre, au violet cristal et au lactose, coulé dans une boîte de Pétri, avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d’autres produits. Recouvrement avec une couche du même milieu.

Dans les même conditions, ensemencement d’autres boîtes avec les dilutions décimales obtenues à partir de l’échantillon pour essai ou de la suspension mère.

Incubation des boîtes à 44°C pendant 24 h ± 2h

A partir du nombre de colonies caractéristiques dénombrées par boîte de Pétri, calcul du nombre de coliformes par millilitre ou par gramme d’échantillon pour essai.

3- Appareillage :

- Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four) ou en chaleur humide (Autoclave)

- Etuve, réglable à 44°C ± 1°C

- Boîte de Pétri stériles de diamètre 90 mm ou 140 mm

- Bain thermostaté réglable à 47°C ± 2°C

- Tubes à essai et flacons de capacité appropriée

- Propipette de capacité nominales de 1ml

- Pipette paille de 1 ml

- pH- mètre, précis de 0,001 unité pH

-Stomacher

-Compteur colonie

-Postes de sécurité microbiologiques

-Brûleurs à gaz

4- Réactifs :

- Eau Peptonée Tamponnée (EPT)

- Gélose au cristal violet, au rouge neutre, à la bile et au lactose (VRBL)

5- Méthode :

Voir la page correspondante

6- Expression des résultats :

* Cas général :

Où :

Σ C : est la somme des colonies comptées sur les boîtes retenues de deux dilutions successives.

V : est le volume de l’inoculum applique à chaque boîte, en millilitres

n1 : est nombre des boîtes retenues à la première dilution

n2 : est nombre des boîtes retenues à la seconde dilution

d : est le taux de dilution correspondant à la première dilution retenue.

Dénombrement des coliformes totaux par comptage des colonies à 30°C

1- Référence :

Méthode de routine NF V 08-050

2- Principe

Ensemencement en profondeur du milieu gélosé à la bile, au rouge neutre, au violet cristal et au lactose (VRBL), coulé dans une boîte de Pétri, avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d’autres produits. Recouvrement avec une couche du même milieu.

Dans les même conditions, ensemencement d’autres boîtes avec les dilutions décimales obtenues à partir de l’échantillon pour essai ou de la suspension mère.

Incubation des boîtes à 30°C pendant 24 h ± 2h

A partir du nombre de colonies caractéristiques dénombrées par boîte de Pétri, calcul du nombre de coliformes par millilitre ou par gramme d’échantillon pour essai.

3- Appareillage :

- Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four)

- Appareil pour la stérilisation en chaleur humide (Autoclave)

- Etuve, réglable à 30°C ± 1°C

- Boîtes de Pétri stériles de diamètre 90 mm ou 140 mm

- Bain thermostaté réglable à 47°C ± 2°C

- Tubes à essai et flacons de capacité appropriée

- Propipette de capacité nominales de 1ml

- Pipette paille de 1 ml

- pH- mètre, précis de 0,001 unité pH

-Stomacher

-Compteur colonie

-Postes de sécurité microbiologiques

-Brûleurs à gaz

4- Réactifs :

- Eau Peptonée Tamponnée (EPT)

- Gélose au cristal violet, au rouge neutre, à la bile et au lactose (VRBL)

5- Méthode :

Voir les pages suivantes

6- Expression des résultats :

* Cas général :

Où :

Σ C : est la somme des colonies comptées sur les boîtes retenues de deux dilutions successives.

V : est le volume de l’inoculum applique à chaque boîte, en millilitres

n1 : est nombre des boîtes retenues à la première dilution

n2 : est nombre des boîtes retenues à la seconde dilution

d : est le taux de dilution correspondant à la première dilution retenue.

* Estimation des petits nombres :

1- Si la boîte, au niveau de l’échantillon pour essai (produits liquides) ou de la suspension –mère (autres produits) ou de la première dilution ensemencée ou retenue, contient moins de 15 colonies, on calcule le nombre estimé Ne

Ne = C/Vxd

C : est le nombre de colonies caractéristiques comptées.

V : est le volume de l’inoculum applique à la boîte, en millilitres

d : est le taux de dilution correspondant à la première dilution retenue.

1- Si la boîte , au niveau de l’échantillon pour essai (produits liquides) ou de la suspension –mère (autres produits) ou de la première dilution ensemencée ou retenue , ne contient aucune colonie , le résultat est exprimé comme suit :

Moins de 1/vd microorganismes par millilitre essai (produits liquides) ou par gramme(autres produits).

d : est le taux de dilution de la suspension-mére ou la première dilution ensemencée ou retenue ;

Arrondir les résultats calculés à deux chiffres significatifs.

Dénombrement des microorganismes par comptage des colonies obtenues à 30°C (FMAT)

1-Référence :

Méthode de routine NF V 08-051

2-Principe :

Ensemencement en profondeur d’un milieu de culture défini Plat Count Agar (PCA), coulé dans une boîte de Pétri, avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d’autres produits.

Dans les même conditions, ensemencement d’autres boîtes avec les dilutions décimales obtenues à partir de l’échantillon pour essai ou de la suspension mère.

Incubation des boîtes à 30°C en aérobiose pendant 72 h ± 3 h.

A partir du nombre de colonies obtenues dans les boîtes de Pétri retenues, calcul du nombre de microorganismes par millilitre ou par gramme d’échantillon.

3- Appareillage :

- Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four)

- Appareil pour la stérilisation en chaleur humide (Autoclave)

- Etuve, réglable à 30°C ± 1°C

- Boîtes de Pétri stériles de diamètre 90 mm

- Bain thermostaté réglable à 47°C ± 2°C

- Tubes à essai et flacons de capacité appropriée

- Propipette de capacité nominales de 1ml

- Pipettes Paille de 1 ml

- pH- mètre, précis de 0,001 unité pH

-Stomacher

-Compteur colonie

-Postes de sécurité microbiologiques

-Brûleurs à gaz

4- Diluants et milieux de culture :

- Eau Peptonée Tamponnée (EPT)

- Plat Count Agar (PCA)

5- Méthode :

Voir les pages suivantes.

6- Expression des résultats :

* Cas général :

Où :

Σ C : est la somme des colonies comptées sur les boîtes retenues de deux dilutions successives.

V : est le volume de l’inoculum appliqué à chaque boîte, en millilitres

n1 : est nombre des boîtes retenues à la première dilution

n2 : est nombre des boîtes retenues à la seconde dilution

d : est le taux de dilution correspondant à la première dilution retenue.